Ejemplo de ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza

Una estrategia para el antagonismo intermicrobiano a menudo utilizado por Proteobacteria es el sistema de secreción de tipo VI (T6SS) genéticamente dependiente del contacto para matar a los competidores adyacentes. Mientras que el ADN liberado por la muerte de T6 se puede adquirir horizontalmente, y luego utilizados para competir con las células vecinas. 

Utilizando Vibrio cholerae naturalmente transformable, proporcionamos el primer apoyo directo para que los genes T6 se intercambien horizontalmente (por ejemplo, de competidores muertos) y se despliegan funcionalmente para competir con las células vecinas.

Ejemplo de ADN recombinante artificial

T: Evolución de la respesta inmune contra las proteínas recombinantes (TcpA, TcpB y FlaA) como una vacuna candidata de subunidad contra el cólera

O: Evaluar las respuestas inmunes frente a las proteínas recombinantes TcpA, TcpB y FlaA o combinación de ellas

G: Genes TcpA, TcpB y FlaA

ER: No especifica

EL: T4 ADN ligasa

V:  Se utilizaron vectores de expresión procariota pET32a (Novagene) y pGEX4T1.

CR: MNCs (células mononucleares) 

MTG: Transfección

MIC: PCR, cultivo celular, análisis de Immunoblot, evaluación de las respuestas inmunes contra proteínas recombinantes

Bibliografía

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28743812/

2.  1025-0298-vac-29-03-136.pdf (sld.cu)

3. Expression in Saccharomyces boulardii of recombinant Toxin-coregulated pilus A subunit (TcpA) of Vibrio cholerae O1 (sld.cu)

Hibridación en la anafilaxia

El análisis de hibridación in situ mostró que los sitios de reacción de PCA tratados con oligonucleótidos de TGF-beta1 anti sentido no mostraron niveles detectables de ARNm de TGF-beta1 y L-histidina descarboxilasa después de la estimulación con IgE anti-DNP. En la hibridación mucho de los casos las alergias se relacionan con la  con la necesidad de indicar una placa o brazalete de alerta médica sobre la infección. 

Bibliografía:

Polysorbates, Biotherapeutics, and Anaphylaxis: A Review - BioProcess InternationalBioProcess International (bioprocessintl.com)

PCR (Reacción en cadena polimerasa)-Anafilaxia

Tema: La PCR en el análisis de alérgenos en tiempo real (RT-PCR).

Objetivos: Evaluar el rendimiento diagnóstico de RT-PCR, midiendo su efecto.

Tipo de muestra: Extracción de sangre.

Tipo de ácido nucleico: ADN (en este caso ADN virus)

Gen o secuencia por amplificar: Gen KARS bajo el método de amplificación de secuencias específicas de ADN gracias al ADN polimerasa. 

Tipo de PCR: RT- PCR  (tiempo real) y RT- PCR múltiple.

Visualización: sus etapas

Extracción de ácidos nucleicos →    retrotranscripción en caso de virus ADN (la enzima genera una cadena de ADN a partir de ARN) →   amplificación y detección al mismo tiempo de copias del virus (dependerá del número de ciclos).  

 

   Hay cambios que provocan variación estructural en el aminoácido 542 de la proteína LysRS y ya no sintetiza, activando exageradamente a los mastocitos en presencia de un alérgeno.

La metilación de ADN es el principal mecanismo epigenético que controla la expresión de genes propios de las células Th1, la expresión de IFNG e IL-4 en células T naive se asocia a hiperacetilación de histonas en IFNG e IL-4, y la mayor metilación del ADN en genes de citoquinas a Th1 hace viable el desarrollo de células Th2.

Bibliografía:

1) Epigenética en enfermedades alérgicas y asma (scielo.cl)

2)La PCR en el análisis de alérgenos: una cuestión polémica - Food & Feed Analysis (r-biopharm.com)

3) Identificado un nuevo mecanismo molecular relacionado con la gravedad de la anafilaxia (clinicbarcelona.org)

Alteración en la epigenómica en la anafilaxia

Los mecanismos epigenéticos a más de estar ligados a histonas, se modifican químicamente como la metilación de ADN, etc. Distintos factores pueden actuar provocando modificaciones que afecten la expresión del gen sin variar secuencia de ADN.

Entre los mecanismos más importantes están:

1. Metilaciones de dinucleótidos CpG en el ADN

2. Modificar colas de histonas 

3. Los microARN reducen estabilidad o eficiencia de la traducción de mARn

Bibliografía:

1. Epigenética en enfermedades alérgicas y asma (scielo.cl)

2. revchilanestv50n01-04.pdf (revistachilenadeanestesia.cl)

Alteración en la traducción en la anafilaxia

 Las investigadoras han llevado a cabo la caracterización de la proteína LysRS (enzima que tiene una función dual). Con papel clave en la síntesis proteíca, regulada por fosforilación en la vía del receptor de alta afinidad por la inmunoglobulina E (IgE) y activa el factor de transcripción MITF, que participa en la transcripción de mediadores proinflamatorios en el mastocito. 

       La sustitución de una prolina por una arginina en el aminoácido 542 de la proteína LysRS provoca cambios, que la afectan, desplaza al núcleo y deja de hacer su función en la síntesis, activando el factor de transcripción MITF en ausencia de estímulo.

El análisis de la estructura y la dinámica de la proteína LysRS, se identifica por primera vez el mecanismo de cambio de la LysRS de la traducción a la transcripción a nivel molecular.

Bibliografía:

1. Ribó, P.; Guo, Y.; Aranda, J; Ainsua-Enrich, E.; Navinés-Ferrer, A.; Guerrero, M.; Pascal, M.; De la Cruz, C.; Orozco, M.; Muñoz-Cano, R.; Martín, M. Science. (citado el 27/06/2021) 2021. Disponible en: «Mutation in KARS: a novel mechanism for severe anaphylaxis»  

2. Universidad de Barcelona. Identificación de un nuevo mecanismo molecular relacionado con la gravedad de la anafilaxia. Revista clínica. (citado el 26/06/2021). 2021. Disponible en: Identificado un nuevo mecanismo molecular relacionado con la gravedad de la anafilaxia (clinicbarcelona.org)

 Alteración de la transcripción

De la distribución de diferentes enzimas (5-LO, FLAP-five lipoxygenase activating protein-, leucotrieno A4 (LTA4)- hidrolasa y leucotrieno C4 (LTC4)-sintetasa).

Sólo la LTC4-sintetasa estuvo sobreexpresada(regulada genéticamente). A este gen se le ha identificado polimorfismo en su región promotora, creando unión adicional para un factor de transcripción, por esta razón aumenta la transcripción.(1.2)

Condiciona a un aumento en la producción de Cys-LT basal y tras la POC, por la supresión del efecto inhibitorio que ejerce la PGE2 sobre la ruta de la 5-LO.

Los glucocorticoides desactivan la transcripción de múltiples genes que codifican proteínas pro inflamatorias. (2)

Bibliografía:

1.G.Pouessel. Anafilaxia en urgencias. ScienceDirect-Elsevier. 2021.   (Consultado el 19 de junio de 2021). Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1245178921452212

2. Bustamante, R. Anafilaxia y shock anafiláctico. Revista Chilena De Anestesia. Noviembre 2020.    (consultado el 20 de junio de 2021). Disponible en: https://www.capacitacionesonline.com/blog/wp-content/uploads/2021/02/Anafilaxia-y-shock-anafilactico-Rev-Chil-Anest-2021.pdf

Alteraciones de la genómica en la anafilaxia 

Diversidad genética

• Polimorfismos genéticos en los genes que codifican receptor a de IL-4, IL-10 e IL-13 se han relacionado con anafilaxia por fármacos y látex. 
• Puede influir en gravedad variantes de angiotensinógeno que se han relacionado con alergia a himenópteros. 
• Niveles bajos de ECA se relacionan con edema faríngeo grave.  
• Mutación del c-KIT D816V ocasiona proliferación de mastocitos.

1. SciELO - Brasil - Anaphylaxis to <i>Agaricus bisporus</i> ingestion Anaphylaxis to <i>Agaricus bisporus</i> ingestion